全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.4260-3 - 2007/05/23 (水) 16:30:29 - 〜 チェック項目としては、 １．DNAフラグメントは適切か、 ２．ライゲーションは適切か、 ３．トランスフォーメーションは適切か、 ４．トランスフォーメーション後の培養は適切か、 があると思います。 どこまでコントロールを置いて確認していますか？

(無題) 削除/引用 No.4260-2 - 2007/05/23 (水) 14:06:32 - 歴史家 過去に繰り返されたトピックです。例えば↓。 http://www.kenkyuu.net/cgi-biotech/biotechforum.cgi?mode=view;start=8;Code=2231

ラーゲーション後のコロニーがでない 削除/引用 No.4260-1 - 2007/05/23 (水) 13:30:04 - ゆうさん はじめまして。 pcDNA3にクローニングされている遺伝子を、Hind�VとEcoR�Xで切断し、 レトロウイルスベクターが持つ、Hpa�TとHind�Vのサイトに組み込もうと 実験をしています。 しかし、ラーゲーション後プレートにスプレットしてもコロニーが 全くでません。バックさえもありません。 理由がわからず困っています。 方法としては 目的遺伝子が乗っているpcDNA3をHind�VとEcoR�Xで切断し アガロースで分離し目的遺伝子を切り出します。 クローニングするベクターをHpa�TとHind�Vでそれぞれ別々に反応させ （Bufferが違うので）切断後アガロースで分離しベクターの切り出し を行いました。 その後、それぞれをアガロースで泳動し濃度をチェックした後に、 1:5の割合で室温２時間でライゲーションを行いました。 トランスフォーム後LBプレートにスプレットし、37℃で培養をしています。 詳しい方がいらっしゃいましたら、お教えいただけますでしょうか。

全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---