全4件 ( 1 〜 4 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.4229-4 - 2007/05/17 (木) 13:48:13 - おお １００％コンフルエントはひとや細胞によって若干異なるかもしれません。細胞によってはコンタクトインヒビッションとかも起こりますし、、、、オーバーコンフなんていう場合もありますからまず細胞は見た目印象でヘルシーそうな状態でしょう。ちょうど、ディッシュの底が見えなくなったときぐらいを目安にして良いと思います。たしかに50%であれば50%が細胞に占有された時ですし。 細胞が少ないとダメージが大きいという感覚は私もありますしiiさんのおしゃる70から90%コンフルエントはいい感じだと思います。ただ処理の仕方、血清などにより幾らかコントロールはできると思います。 "若干細胞数が少なかった"がどの程度か分かりませんが、失敗した原因になりうると思います。

(無題) 削除/引用 No.4229-3 - 2007/05/17 (木) 00:48:12 - ii 自分も293、Lipo2000を使っています。 トランスフェクション時に293は70から90%コンフルエント。 DNA量は0.5から2ugの間。 この範囲内であればほとんど死ぬこともなく出来ています。 ただ293はちょっとしたことですぐに機嫌が悪くなるような感触を持っています。コンフルエントにしすぎたり、継代をかなり重ねていたり・・・ もしストックがあるようなら新しく起こしなおすのも一つかと思います。

(無題) 削除/引用 No.4229-2 - 2007/05/16 (水) 22:09:14 - 〜 ディッシュの底が見えなくなった状態を100%と呼びます。 (そこからさらに増える細胞もありますが) 細胞数はリポフェクション時の生存率に影響します。 293の場合、逆に増えすぎてはがれやすくなる場合もあります。 細胞密度だけでなく、リポフェクションの時間とプラスミド量によっても生存率が変化します。 若干細胞数が少なかった時に、どれくらい他のパラメーターをコントロールできていたのでしょうか？ Lipofectamine2000は比較的細胞毒性が高いと思いますが、 この試薬を選んだ際には、細胞毒性も考慮して選んだのでしょうか？

トランスフェクションと細胞毒性について 削除/引用 No.4229-1 - 2007/05/16 (水) 17:32:07 - M 最近293でトランスフェクションを行う時に細胞が死にやすくて困っています。 細胞数が少ないと細胞が死に安いといいますよね。 ２９３ではどれくらいが１００％コンフルエントの状態といえるのでしょうか？ ディッシュの底が見えなくなったくらいでは何％といえるのでしょうか？ 失敗した時は成功した時に比べて若干細胞数が少なかったかもという気もするのですが、それだけで顕著に死にやすくなるものでしょうか？ ちなみに使っている試薬はlipofectamine2000です。

全4件 ( 1 〜 4 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---