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(無題) 削除/引用 No.4185-3 - 2007/05/10 (木) 10:34:47 - R 早速の回答ありがとうございます。 コンストラクトはpET28aでC末端にHisがついおり、常温、0.01から1 mMまでの IPTGで時間もふって条件を検討しました。 確かに、N側にタグがあると良いですね。 是非試してみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.4185-2 - 2007/05/10 (木) 08:25:46 - 博打 発現方法が少し不明ですが、もしやっていなければ、GSTフュージョンを私なら試します。GST部分のせいでいろいろ追跡がしやすいですし、GST部分切断除去可能ですからね。

大腸菌でタンパク質がインクルージョンにもない 削除/引用 No.4185-1 - 2007/05/10 (木) 06:28:21 - R お世話になっております。現在、大腸菌Rosetta-Gami2で約15KDaのタンパク質を 発現しようと試みているのですが、内部シークエンスには問題無いのですが、 どんなに条件を変えようとインクルージョンにさえタンパク質は認められません。 本タンパク質は大腸菌ももっており、毒性があるとは考えにくいものです。 このようなことはよく起こるのでしょうか？また、どのような手段で、 何が起こっているのかを検討すればよいのでしょうか。 発現が何らかのメカニズムで抑制されているということはあるのでしょうか。 suggestionを頂ければ幸いです。

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