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ウェスタンブロットの分子量マーカーが… トピック削除
No.4162-TOPIC - 2007/05/07 (月) 01:44:38 - oshima
ウェスタンブロットがうまくいかなくなってしまいました。

分子量マーカーが電気泳動開始後、分子量マーカーが濃縮ゲル(4%)から分離ゲル(10%)まで達したところで、マーカーがいつもなら何本かに分離するはずが、2〜3本しか出ず、うまく分離できなくなってしまいました。
サンプルは見た目ではそのまま最後まで流れていく様子です。
実験系は何も変えていません。
ゲルの組成や泳動バッファーがおかしくなったのでしょうか

なにかよいアドバイスをいただきたく存じます。
 
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(無題) 削除/引用
No.4162-4 - 2007/05/07 (月) 19:12:01 - 名無し
低電圧なら電流値、定電流なら電圧値の変化は前と比べてどうですか。前と比べてガラスが熱くなったりしませんか。bufferがおかしいとこの辺が違ってくるとおもいます。

(無題) 削除/引用
No.4162-3 - 2007/05/07 (月) 12:04:43 - ampm
サンプル調製に問題が無いようでしたら、大抵バッファー系が問題なんでは
と思います。まとめて全部自分で作りなおすのが良いのではないでしょうか。
pHメーターの校正も重要です。

(無題) 削除/引用
No.4162-2 - 2007/05/07 (月) 10:05:38 - R
サンプルバッファーのメルカプト臭は残っていますか?
以前、メルカプトが失活していて、分離しなかった経験があります。

ウェスタンブロットの分子量マーカーが… 削除/引用
No.4162-1 - 2007/05/07 (月) 01:44:38 - oshima
ウェスタンブロットがうまくいかなくなってしまいました。

分子量マーカーが電気泳動開始後、分子量マーカーが濃縮ゲル(4%)から分離ゲル(10%)まで達したところで、マーカーがいつもなら何本かに分離するはずが、2〜3本しか出ず、うまく分離できなくなってしまいました。
サンプルは見た目ではそのまま最後まで流れていく様子です。
実験系は何も変えていません。
ゲルの組成や泳動バッファーがおかしくなったのでしょうか

なにかよいアドバイスをいただきたく存じます。

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