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脊髄のホモジナイズについて トピック削除
No.4136-TOPIC - 2007/05/01 (火) 14:53:07 - 脊髄
RATの脊髄を採取し、それをホモジナイズしてRT-PCRを行っています。
採取した脊髄をホモジナイズするとき、一旦液体窒素にて凍らせるべきか、そのままするべきか迷っています。
どちらの場合も、脊髄採取から２０分ぐらいで、RNeasy mini kitのbuffer RLT液にてホモジナイズしています。
すみませんが教えてください・・・
　
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(無題) 削除/引用
No.4136-2 - 2007/05/07 (月) 16:02:17 - 山師
過去に同じような実験をやっていた者です。
RNAは分解されやすいので、できるだけ早く、冷条件で脊髄を摘出することが重要です。
私の場合、摘出した脊髄組織をRNAlater液に浸して冷条件にしておいて、都合のつく時間にホモジしてました。
RNAlaterは浸して冷条件であれば安定ということで便利である一方、若干高めです。
一応、大体のmRNAは測定可能でした。

ご参考になれば。

脊髄のホモジナイズについて 削除/引用
No.4136-1 - 2007/05/01 (火) 14:53:07 - 脊髄
RATの脊髄を採取し、それをホモジナイズしてRT-PCRを行っています。
採取した脊髄をホモジナイズするとき、一旦液体窒素にて凍らせるべきか、そのままするべきか迷っています。
どちらの場合も、脊髄採取から２０分ぐらいで、RNeasy mini kitのbuffer RLT液にてホモジナイズしています。
すみませんが教えてください・・・
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