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固定 削除/引用 No.3995-10 - 2007/06/06 (水) 20:29:07 - くだん 通常凍結切片を作る時は、メタカーンで前固定はしない（出来ない）と思います。 普通は生で凍らせて薄切後、メタカーン（現在はエタノール＋酢酸が普通）で固定して染色工程に入ります。

(無題) 削除/引用 No.3995-9 - 2007/06/06 (水) 14:44:58 - 組織染色+ そもそも、アミロイドβを染めたいのですが、なかなかうまく出来ず、メタカーンであればうまく染色できるとの情報を得ました。その方はパラフィンで包埋して切片を作製しているようですが、凍結切片でも出来ないのかと検討しているところです。 以上の理由から検討していましたが、うまくいかなそうなので別の方法を考えます。

質問です。 削除/引用 No.3995-8 - 2007/06/05 (火) 14:05:35 - くだん 質問です。 そもそもメタカーンで前固定しなくてはならない理由は、なんなんでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.3995-7 - 2007/06/05 (火) 02:05:22 - 免疫染色 masakaさん 1●70％→50％…とエタノール濃度を下げて，最終的には何らかの緩衝液（+ショ糖）の様なものに置換する． これを試してみましたが、切片がぼろぼろでした。他に何か手はないのでしょうか？ ご存知の方よろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.3995-6 - 2007/05/28 (月) 15:26:33 - 組織染色+ 早速のご返答ありがとうございます。 ある疾患で特異的に沈着するたんぱく質を染色しようと試みています。 １の方法で試してみます。

(無題) 削除/引用 No.3995-5 - 2007/05/28 (月) 14:37:44 - masaka まず，メタカーン固定後に，どのような染色をするのでしょう． その染色をする際の固定法として，メタカーンが必須であるなら， 1●70％→50％…とエタノール濃度を下げて，最終的には何らかの緩衝液（+ショ糖）の様な 　ものに置換する． 　（70%エタノールそのものは何℃で凍結しますか?） 2●顕微鏡像は形態的に劣ると思いますが，未固定のまま凍結切片を作製し， 　その切片に対してメタカーン固定，染色と進む の様な方法が良いのではないでしょうか．

(無題) 削除/引用 No.3995-4 - 2007/05/28 (月) 14:20:19 - 組織染色 アドバイスのとおり、メタカーン液で固定後、７０％エタノールに置換して凍結切片を作製しようとしましたが、全く凍結しませんでした。 いくつかの文献を読むと、メタカーン液で固定後パラフィン包埋をしていました。包埋その他の後処理が必要なのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.3995-3 - 2007/03/28 (水) 19:31:46 - 組織染色 ありがとうございました。 クロロホルムも入っているので灌流固定は難しいと思っていましたので、一晩つけて試してみます。

(無題) 削除/引用 No.3995-2 - 2007/03/28 (水) 13:03:55 - 組織 メタカンはパラフィン包埋が一般的ですが，凍結でも可能だと思います． やったことがないので保証はできませんが． 固定方法ですが，小動物の脳だと一般的には灌流固定がベストです． ただ，アルコールを灌流できるかがわからないので（私はアルデヒド液しか使ったことないです），浸漬固定が無難だと思います． 4℃で数時間〜1晩漬け込めば十分です． その後，70%エタノールに移してから，通常の凍結包埋操作をすれば良いと思います．

メタカーン 削除/引用 No.3995-1 - 2007/03/27 (火) 23:47:25 - 組織染色 現在メタカーン固定後に脳凍結切片の組織染色を予定しています。 そこで教えていただきたいのですが、メタカーン固定で脳を固定する場合、どのようにすればよいのですか？ そもそもメタカーン固定後に凍結切片の作製は可能なのでしょうか？

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