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(無題) 削除/引用 No.3811-2 - 2007/06/05 (火) 16:36:10 - あう 一番最初にDEPC処理したPBSwashを5分2回で行っています。OCTはそれで大体除去され、OCTがバックとして染色されることはないと思いますが。 間違っているかもしれませんが、プロK処理していないならPFAの後固定は必要ないのではないでしょうか

マウス凍結切片を用いたin situ時におけるバックグラウンド 削除/引用 No.3811-1 - 2007/02/21 (水) 23:01:18 - ん〜 マウスの新鮮胚をOCTで包埋し、切片を切ってin situを行っています。 問題はAP発色の際に切片のOCT部分がバックグラウンドとして発色してしまうことです。 手順は以下の通りです。 1)16umの切片を作製 2)２時間ほど風乾 3)4% PFAでfix 4)PBSで5min×3の洗浄 5)RT,数時間プレハイ 6)72℃, O/N　ハイブリ 7)wash 8)BCIP/NBTで発色 おそらくOCTをwashする前にPFAでfixしているのが問題なのではないかと思い、潅流固定した 切片でpost-fixをせずに行ってみましたが、それでもやはりOCT部分が染まってしまいます。 ちなみにスライドグラスはMASコートを用いています。 wash時間を長くすれば解決しそうな気もしますが、一応実績のあるプロトコルに沿って行って いますので、ほかに何か問題があるのかと思い、皆様に解決法をお聞きしたく、 投稿させていただきました。 何かお気づきの点がございましたら御指南下さい。

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